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ऑर्गेनोइड्स को लेबल करने के लिए AMSBIO के कस्टम लेंटिवक्टर


AMSBIO ने फ्रैंकफर्ट, जर्मनी में बुकमैन इंस्टीट्यूट फॉर मॉलिक्यूलर लाइफ साइंसेज (BMLS) में फ्रांसेस्को पैम्पलोनी और उनकी टीम को कस्टम लेंटिवक्टर की आपूर्ति की है, जिससे उन्हें अपने ऑर्गेनोइड्स में सेल न्यूक्लियर और F-actin साइटोस्केलेटन की कल्पना करने की अनुमति मिलती है।

एक लेंटिवायरल कण का चित्रण। छवि क्रेडिट: AMSBIO

ऑर्गेनोइड्स रूपात्मक रूप से विषम 3-आयामी सेल कल्चर सिस्टम हैं जो विकास, होमोस्टैसिस, पुनर्जनन और रोगजनन के दौरान स्तनधारी अंगों में सामूहिक सेल व्यवहार के सिद्धांतों को समझने के लिए एक आदर्श मॉडल प्रदान करते हैं। ऑर्गेनोइड्स के अंतर्निहित सेल संगठन सिद्धांतों की जांच करने के लिए, बीएमएलएस शोधकर्ताओं ने सूक्ष्म तकनीकों का उपयोग करते हुए समानांतर में सैकड़ों अग्न्याशय और कोलेजनोकार्सिनोमा ऑर्गेनोइड्स की नकल की।

इस अग्रणी कार्य के परिणामस्वरूप – बीएमएलएस शोधकर्ता एकल-कोशिका (माइक्रोस्केल), व्यक्तिगत-ऑर्गनॉइड (मेसोस्केल), और संपूर्ण-संस्कृति (मैक्रोस्केल) स्तरों पर विकास की निगरानी और ऑर्गेनोइड के व्यवहार को मापने में सक्षम थे। इन विस्तृत व्यक्तिगत ऑर्गेनॉइड परिमाणीकरण ने बीएमएलएस को अध्ययन के तहत अग्न्याशय और कोलेजनोकार्सिनोमा ऑर्गेनोइड के लिए एक यांत्रिक 3 डी एजेंट-आधारित मॉडल तैयार करने में मदद की है।

माइकल कोच, एक पीएच.डी. बीएमएलएस अनुसंधान समूह के छात्र ने कहा, “चूंकि एपिथेलियल ऑर्गेनोइड्स में स्टेम सेल जैसा चरित्र होता है, जिससे उन्हें ट्रांसड्यूस करना मुश्किल हो जाता है, उन्हें अनुकूलित ट्रांसडक्शन प्रोटोकॉल की आवश्यकता होती है। AMSBIO कस्टम हाई-टिटर लेंटिवायरल कणों ने हमें इस मुद्दे का एक आदर्श समाधान प्रदान किया। H2B-eGFP और LifeAct-mCherry के साथ लेबलिंग (एपिथेलियल) ऑर्गेनोइड्स द्वारा, AMSBIO लेंटिवक्टर्स / लेंटिवायरल कणों का उपयोग करके, हम एक स्थिर प्रतिदीप्ति संकेत के साथ कई दिनों में ऑर्गेनॉइड डेवलपमेंट (लाइट शीट माइक्रोस्कोपी / LSFM द्वारा) में गतिशील सेलुलर प्रक्रियाओं का अध्ययन करने में सक्षम थे। इन कस्टम लेंटिवक्टर्स ने हमें एपिथेलियल ऑर्गेनॉइड विकास जैसे गठन, ध्रुवीकरण और ल्यूमिनल विस्तार में अत्यधिक गतिशील प्रक्रियाओं में जटिल अंतर्दृष्टि प्राप्त करने में सक्षम बनाया। हमारे पूरे शोध के दौरान – AMSBIO ने हमारे ऑर्गेनोइड्स को इष्टतम वितरण और अभिव्यक्ति के लिए वेक्टर डिज़ाइन में संभावित विकल्पों पर चर्चा करके बहुत समर्थन दिया। हम लंबे समय तक लाइव माइक्रोस्कोपी अध्ययनों में मांग / नाजुक कोशिकाओं को फ्लोरोसेंटली लेबलिंग के लिए AMSBIO कस्टम लेंटवायरस की अत्यधिक अनुशंसा करते हैं और फिर से उनकी सेवा का उपयोग करने में संकोच नहीं करेंगे।

एएमएसबीआईओ में एक बिजनेस यूनिट मैनेजर डॉ माजा पेटकोविक ने टिप्पणी की, “हमें बीएमएलएस शोधकर्ताओं द्वारा सेल न्यूक्लियस और लाइफएक्ट-एमचेरी को एफ-एक्टिन साइटोस्केलेटन की कल्पना करने के लिए सक्षम करने के लिए फ्लोरोसेंट फ्यूजन प्रोटीन एच 2 बी-ईजीएफपी व्यक्त करने वाले लेंटवायरस की आपूर्ति करने के लिए चुना गया था। उनके ऑर्गेनोइड विकास की सेलुलर गतिशीलता को ट्रैक करने के लिए”।

हमारे लेंटिवायरल वैक्टर मूल्यवान जीन वितरण उपकरण हैं। हम किसी विशिष्ट जीन के लिए रेडी-टू-यूज़ कॉन्स्टीट्यूशनल या इंड्यूसिबल ओवर-एक्सप्रेशन लेंटिवायरस बनाने के लिए एक कस्टम सेवा की पेशकश कर सकते हैं। हम आपके चुने हुए जीन को हमारे लेंटिवायरस एक्सप्रेशन वैक्टर में उप-क्लोन करेंगे और प्रत्येक जीन के लिए एक्सप्रेशन लेंटिवायरस तैयार करेंगे।

डॉ माजा पेटकोविच, बिजनेस यूनिट मैनेजर, AMSBIO

AMSBIO का लेंटिवायरल सिस्टम जीन अभिव्यक्ति या नॉकडाउन के लिए लेंटिवक्टर का उपयोग करने वाला एक नया जीन वितरण उपकरण है। लेंटवायरस प्रभावी रूप से विभाजित और गैर-विभाजित स्तनधारी कोशिकाओं दोनों को ट्रांसड्यूस कर सकता है, और मेजबान जीनोम में एकीकृत कर सकता है, जिससे विवो और इन विट्रो दोनों में स्थिर दीर्घकालिक, उच्च-स्तरीय जीन अभिव्यक्ति की अनुमति मिलती है। पारंपरिक रेट्रोवायरल सिस्टम के विपरीत, AMSBIO लेंटवायरस अधिक सक्रिय रूप से गैर-विभाजित कोशिकाओं के नाभिक में आयात किया जाता है और सेल चक्र से स्वतंत्र मेजबान सेल के जीनोम में स्थिर रूप से एकीकृत होता है।

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